Pwosesis pwodiksyon an nan elektwoforèz jèl poliakrilamid (PAGE) sitou gen ladan etap tankou preparasyon jèl, operasyon elektwoforèz, tach ak obsèvasyon rezilta.
Preparasyon jèl Preparasyon jèl separasyon (10%): Melanje 0 ml ddH₂O, 3 mL jèl 30% stock, 5 mL 5 mol/L Tris-HCl, 1 mL 10% SDS ak 1 mL 10% AP, ajoute 10 μL μL nan TEMED, epi ajoute TEMED anba a, epi ajoute seal TEMED la, μL. byen. Vide melanj sa a ant plak vè yo, sele tèt la ak dlo, epi tann pou 30 ~ 60 minit pou jèl la konplètman polymerize.
Preparasyon pou anpile jèl (4%): Melanje 4 ml ddH₂O, 33 ml jèl stock 30%, 25 ml 1 mol/L Tris-HCl, 0.2 ml 10% SDS ak 0.2 ml 10% AP, ajoute 2 μL TEMED epi melanje byen imedyatman. Vide dlo a sou jèl separasyon an, ajoute melanj sa a, epi imedyatman mete peny a ant plak vè yo, ap tann pou 15-30 minit pou jèl la anpile konplètman polymerize.
Operasyon elektwoforèz Trètman echantiyon: Melanje echantiyon an ak yon kantite egal tanpon chaj 2XSDS, chofe a 100 degre pou 3-5 minit, ak Lè sa a, santrifuje a 12,000 rpm pou 1 minit, epi pran supernatant la pou analiz SDS-PAGE.
Chajman: Pran 10 μL nan echantiyon pwovoke ak san pwovoke epi ajoute yo nan pisin echantiyon an, epi ajoute 20 μL nan estanda pwoteyin ki ba pwa molekilè kòm yon kontwòl.
Electrophoresis: Ajoute 1X tanpon elektwoforèz nan tank elektwoforèz la, konekte ekipman pou pouvwa a, kenbe vòltaj la nan jèl la anpile nan 60V, ak vòltaj la nan jèl la separasyon nan 100V. Lè bromophenol ble rive anba tank elektwoforèz la, sispann elektwoforèz la (apeprè 3 èdtan).
Tach ak obsèvasyon rezilta
Tach: Retire jèl la nan plak vè a epi tach li ak solisyon tach Coomassie Brilliant Blue pou 4 a 6 èdtan nan tanperati chanm. Detache: Mete jèl tache a nan solisyon detache epi detache l plizyè fwa jiskaske bann pwoteyin lan parèt klè. Obsèvasyon rezilta yo: Apre detaining, yo ka pran foto jèl la epi sove. Apre etap destaining la fini, mete jèl la anba sistèm nan pwosesis imaj pou fotografi epi sove rezilta yo nan yon disk diskèt.